【摘要】
目的 了解海馬各區Bcl2陽性細胞在鉛神經毒機制中的作用。方法 采用免疫組化（ABC）法觀察腹腔注射130mg/kg醋酸鉛溶液大鼠12和24h后海馬CA1區和CA3區Bcl2陽性細胞數目的變化。結果 染鉛12和24h大鼠海馬CA1區Bcl2陽性細胞數目（分別為126.05±33.21和(57.45±37.66）與對照組比較（201.94±31.72）明顯減少（P>0.05,或P<0.01），但各組大鼠海馬CA3區及其他組的CA1區Bcl2陽性細胞數與對照組比較，差異無統計學意義（P>0.05）。結論 染鉛大鼠海馬CA1區Bcl2陽性細胞數目減少可能與鉛的神經毒作用有關。【關鍵詞】 鉛
有文獻報道，鉛的神經毒性可能和腦細胞凋亡有關〔1，2〕。近年來研究表明，海馬結構各亞區的Bcl2基因表達異�？赡苁倾U觸發海馬神經細胞凋亡發生的主要介導因素〔3〕。目前發現，Bcl2（B cell lymhona/leuRenia2)基因在細胞凋亡調控過程中起著重要作用，Bcl2蛋白不僅具有抗淋巴細胞凋亡作用，也具有抗神經細胞凋亡的作用〔3〕。張榮〔4〕等采用流式細胞儀研究發現，染鉛與腦細胞發生凋亡率有劑量反應關系，與Bcl2含量呈現負相關。但染鉛對海馬不同亞區Bcl2蛋白表達的影響，目前尚不清楚。本研究采用免疫組化法觀察染鉛不同時點大鼠海馬CA1區和CA3區Bcl2陽性細胞數目的動態變化，以了解鉛對海馬各區細胞的影響。1 材料與方法
11 實驗動物及處理 選用剛斷乳健康Wistar大鼠30只，雌雄各半(天津市勞動衛生研究所)。自由飲水、普通飼料適應性喂養3d。隨機分為對照組和染鉛3，6，12和24h組共5組，每組6只（雌雄各半），一次性腹腔注射進行染毒：（1）染鉛組：130mg/（kg·bw）的醋酸鉛水溶液；（2）對照組：等體積09% NaCl。
12 實驗方法
121 取材和切片 染鉛組大鼠分別于染毒3，6，12，24h結束時腹腔注射戊巴比妥鈉（60mg/kg）麻醉，開胸，夾閉腹主動脈，經左心室插管，用37℃生理鹽水100～150ml快速沖洗后，以含4%多聚甲醛的磷酸鹽緩沖液（PBS）（01mol/L,pH74)灌注固定，迅速取腦后，置多聚甲醛中繼續固定7～9h（4℃），移入20%蔗糖溶液浸泡12h以上。恒冷箱連續冰凍切片（片厚為50μm),進行Bcl2免疫組化反應。
122 Bcl2免疫組化反應 切片移入37℃ TritonH2O2中反應30min,PBS緩沖液漂洗后以3%正常羊血清封閉30min，然后加Bcl2一抗（1：200），4℃溫盒內孵育72h后，免疫組化法（ABC）顯色，常規裱片，脫水，透明，封片。
123 結果判斷 Bcl2陽性細胞顯棕色或棕色反應顆粒，不顯色為陰性反應；以Bcl2陽性的癲癇大鼠海馬切片為陽性對照，以正常羊血清代替Bcl2一抗作為對照，結果為陰性反應；以01mol/LPBS(pH 74)代替Bcl2一抗為空白對照，結果為陰性反應。
124 Bcl2陽性細胞計數 每組選取對應斷面的海馬腦片15張（每只動物取2～3張），采用尺型計數器在相同放大倍數（×200）的光鏡下，分別計數CA1和CA3區每毫米的陽性細胞數。
13 統計分析 采用SPSS80軟件進行分析。
2 結果
21 不同染鉛時間海馬區光鏡下觀察結果 光鏡下，海馬結構各區存在Bcl2反應陽性神經元；染鉛3h時，海馬各亞區均無明顯變化；染鉛6h時，海馬CA1和CA3區Bcl2陽性細胞顯色稍加深，陽性細胞數有所增加；染鉛12h時，海馬CA1區陽性細胞顯色明顯變淺，陽性細胞數明顯減少，而CA3區未見明顯變化；染鉛24h，海馬CA1區與12h比較Bc12陽性細胞顯色加深，陽性細胞數漸增多，但較對照組的陽性細胞數少，顯色強度弱，而CA3區未見明顯變化。
22 不同染鉛時間海馬區陽性細胞數組間比較(表1)
表1 不同染鉛時間大鼠海馬各區Bcl2陽性細胞數比較（略）
注：與對照組比較，* P<005,** P<001;腦片數=15
3 討論
有報道〔2，4〕，染鉛大鼠大腦皮層、海馬和小腦細胞凋亡率均明顯高于對照組，Bcl2蛋白是一種神經保護蛋白，其抗凋亡作用與其抗氧化作用有關〔5〕。張榮等發現，大鼠染鉛5d后,皮層、海馬和小腦Bcl2基因表達下降，Bcl2含量與染鉛劑量呈相關〔4〕。鑒于細胞凋亡對于胚胎發育、維持細胞總體數量等過程都具有重要作用，所以腦細胞的凋亡必然會對中樞神經的結構和功能造成損傷。鉛對于海馬不同亞區神經元的代謝及功能如LTP的影響不同〔6〕，推測鉛對海馬不同亞區Bcl2陽性細胞的影響可能不同。進一步研究染鉛對海馬不同亞區Bcl2蛋白表達的影響，將對深入了解鉛干擾學習記憶機制提供重要依據。本研究于大鼠染鉛12h后，觀察到海馬CAl區Bcl2陽性細胞數目明顯減少(P<001),24h時仍處于較低水平(P<005),而在不同時間染鉛組與對照組間海馬CA3區Bcl2陽性細胞數差異已無統計學意義(P>005)。鉛的神經毒性作用尤其是對學習記憶影響的機制相當復雜，鉛對海馬不同亞區Bcl2蛋白表達的不同影響僅僅是其分子機制的一個環節，完全闡明鉛神經毒性，尤其是對學習記憶影響的機制尚需深入研究，但鉛對海馬不同亞區Bcl2蛋白表達的不同影響說明其作用機制與海馬CAl區細胞凋亡保護基因的蛋白表達水平下調有關。【參考文獻】
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